Методы создания рекомбинантных молекул ДНК

Рекомбинантные молекулы ДНКОдин из самых важных способов образования рек-ДНК сводится к умению нуклеиновых кислот (НК) резко возвращать первоначальную форму в процессе подогрева до 100 °С в среде с большим содержанием щелочи (рН 14). В процессе подогрева до такого значения температуры газы оснований деструктурируются и ДНК разрушается на две разных участка.

Этот процесс называют расщеплением ДНК (второе название — плавление). В биологической технологии рек-ДНК часто применяют два разных метода секвенирования ДНК: химической природы и ферментативной природы. Эти методы очень качественны, динамичны в исполнении и результатах.

Результаты текущих методов помогают также на структуре генного кода узнать аминокислоты и последовательность белка, в соответствии с последовательностью нуклеотидов в определенном гене. Определенный участок ДНК, отмеченный 32Р по 5′-концу, проходит специальное расщепление по исходному нуклеотиду (например, В), в результатах чего мы получим радиоактивные участки разнообразной длины.

Последние распределяются по длине во время гель-электрофореза. А радиоактивные участки выявляются из них при помощи радиоавтографии. Часто химический способ расщепления ДНК проводится одновременно для четырех определенных участков ДНК при помощи химических препаратов, которые расщепляют их по определенным нуклеотидам, а над полученными препаратами проводят электрофорез на одинаковых дорожках того же геля, и только по этим результатам следует определять последовательность нуклеотидов ДНК.

Энзиматический способ представлен энзиматическим встраиванием нуклеотида, производящий терминирующую функцию цепи полинуклеотидов. В данном способе часто применяют фосфаты, где дезоксирибоза, полученная в исходных нуклеотидах, не существует. Такой индуцированный нуклеотид, внедренный в участок ДНК при использовании ДНК-полимеразы, не дает приклеиться следующему нуклеотиду.

Синтез участков ДНК при помощи праймера и некоторого количества встроенных нуклеотидов предполагает получение участков ДНК в форме «лестницы», и если для синтеза таких участков использовать помеченную ДНК (чаще всего делают несколько реакций получения с применением нескольких нуклеотидов), и электрофорез делать на нескольких дорожках с гелем.

Таким образом определяется последовательность нуклеиновых кислот. Инновационный способ основан на флуоресцентном исследовании комплектации участков ДНК в процессе перемещения на одинаковой дорожке с гелем. Повышение активности вирусов может быть вызвано фенотипическими изменениями во взаимодействии вирусов между собой и их кумулятивным действием на растение-носитель (при синергизме вирусов и транскапсидации) или иметь в своей основе генетические изменения вирусной РНК при ее рекомбинации с РНК трансгенного устойчивого к вирусам растения.

Вам понравиться